支原体固体培养液体培养假阴性和假阳性的鉴 [复制链接]

上图是我们工作中常见的支原体液体培养及药敏二合一试剂。

实际工作中，如果采用这种单一试剂进行泌尿生殖道支原体培养时，我们会发现其阳性率特别的高。高阳性率虽然是莆田系的男科妇科期望的，但对于一个较真的检验人来说，我们比须清楚，虽然支原体（解脲脲原体和人型支原体）在泌尿生殖道多有定植，但总体阳性率不超过40%（阳性不表示支原体致病，阴性也不表示不存在定植，仅提示支原体的量是否已达到试剂的敏感性范围）。所以，当您实验室阳性率超过这个比例的时候，就比须找原因。

这类试剂除了高阳性之外，我们还能遇到很多无法报告的情况。如花板（药敏结果混乱），全阳，以及液体培养瓶与板条之间阴阳性相反等等情况。很多时候我们仅仅当作实验操作不严谨处理，并没有去查阅更多文献，深刻了解这类现象出现的各种原因。

今天，笔者就来对这类情况进行一些分析。

首先，我们要知道这类液体培养及药敏二合一试剂的原理。简单说来就是一个专用的支原体液体培养基，加上酸碱指示剂，利用支原体分解尿素产碱，从而改变液体培养基的PH值，使得液体培养基出现颜色变化。当培养出支原体的时候，支原体分解尿素产碱性物质导致液体PH升高，呈红色颜色改变。

明白了这个原理，我们就能分析其假阳性与假阴性情况类型。

1）只要液体培养基中有碱性物质存在，液体培养基就能呈阳性（红色）表象，无论这个碱性物质是不是来自于支原体的代谢。现实中可以导致该液体培养基PH升高的情况实在是太多，比如样本被碱性物质（碱性洗液）污染，或者一些产碱性的微生物（生长缓慢的阴道加德纳菌）存在等等。

2）相反，哪怕支原体阳性，同时有一种产酸的细菌存在，或者样本被酸性物质污染等等，这些酸性物质会中和掉支原体代谢生成的碱性物质，从而导致培养基不出现颜色变化，造成假阴性。

我们尤其应该重视的是产酸与产碱性细菌的生长引起的假阴性和假阳性情况，特别是那种在这类培养基中生长缓慢的产酸与产碱菌，往往不会引起液体培养基的浑浊变化，其后的抗菌药物谱对其往往也有相应的抑制作用，极其不易被我们发现，从而造成误诊和漏诊。

所以，对于一个严谨的实验室来说，我们单采用这样一类液体试剂进行支原体的培养与药敏实验是远远不够的。我们必需要有另一种方法能辅助我们鉴别是否有其它菌对实验结果产生影响。采用支原体固体培养基培养，并于光学显微镜下观察是否存在支原体生长菌落是简便的有效方法。

重点提示：以上方法不仅适用于泌尿生殖道支原体的鉴定，同样适用于肺炎支原体的鉴定。对于临床来说，笔者不推荐液体培养基转种固体平板后再观察的方法。因为，其一液体培养基本对支原体已经起到了增菌作用，导致结果失真，支原体作为泌尿生殖道常见定植微生物，属于机会致病微生物，其对人体致病有菌量依赖性；其二也延长了报告发放时间。所以，笔者推荐支原体固体培养基与液体培养及药敏实验同时实验，市面上已有很便于光学显微镜下观察的支原体固体培养基条块试剂，也便于实验室标准化。

上图为光学显微镜下观查到的MH合并UU菌落生长现象

上图为光学显微镜下观查到的MH合并UU菌落生长现象

上图为光学显微镜下观查到的UU菌落生长现象。注意样本之间UU菌落大小差距较大，可能与样本种UU量有关。UU量少的时候菌落较大，反之较小。对于大型UU菌落而言，其形态也多样，对于新手而言，可以结合是否在划线之上，以及顺着划线出现形态变化进行鉴别。